灵芝菌种如何采用矿油封藏法?
什么是灵芝菌种矿油封藏法
矿油也称为液体石蜡,故也称为液体石错保藏法。是将灭菌的液体石蜡注入到待保藏的灵芝菌种斜面上,使菌种与外界空气隔绝。其作用是隔绝氧气交流、防止培养基水分蒸发、降低微生物的新陈代谢活动、推迟菌种老化,达到延长培养物的生命,从而延长保存时间的目的。
灵芝菌种矿油封藏操作方法
1、矿油的灭菌:将液体石錯装入三角瓶中(装至瓶体积的1/3),塞好棉塞,同时准备一套装有虹吸管的与三角瓶配套的橡皮塞,用纸包扎好,一起放置到高压灭菌锅中消毒,在1.1千克/厘米2压力下灭菌30分钟。然后将装有石蜡的三角瓶置于40℃温箱中,放置10天左右,使液体石蜡中的水分蒸发干净,备用。
2、接种培养:将需要保藏的灵芝菌种,接入到适宜的斜面培养基上,接种后,放置到最适宜温度下培养,待斜面长满健壮菌丝后,即可取出注蜡。
3、灌注石蜡:在无菌室内,将无菌的带有虹吸管的橡皮塞装到液体石蜡的三角瓶上,然后用虹吸管将液体石蜡注入到斜面培养基内,以液面高出斜面培养基顶部1厘米为宜。
4、封闭棉塞保藏:将灌注好液体石蜡的试管加棉塞,外包塑料薄膜或将试管口外多余的棉塞剪去,用石蜡涂于棉塞顶部及管口的四周,然后再用牛皮纸包扎试管。也可用无菌的橡皮塞代替棉塞。将试管置于冰箱或室内阴凉干燥处保藏。要定期检查,发现培养基露出液面必须及时补加无菌液体石蜡。
5、恢复培养:恢复培养时不必倒去石蜡,用接种工具从斜面挑取菌丝块,尽量滴尽附带的石蜡,移植到新的培养基上,必须经过两次转接,才能获得正常生长的菌丝。液体石蜡易燃,使用时要注意防火。移接时,接种工具尽量少带蜡,避免因蜡在火焰灭菌时,爆炸飞溅。
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